Різноманіття бактеріальних інфекцій вимагає чіткої ідентифікації збудника і визначення його видової приналежності. Визначити тип мікроорганізму мікробіологам допомагають його тинкториальні властивості - сприйнятливість мікроба до фарбування різними барвниками. Цей спосіб дозволяє дослідити морфологію збудника. Тинкториальні властивості бактерій мають велике значення для практичних і теоретичних досліджень в області мікробіології.

Дослідження мікробів

В бактеріології існує багато методів фарбування мікроорганізмів. Всі вони засновані на тинкториальных властивості бактерій. Фарбування дозволяє визначити їх форму, будову, розмір, взаємне розташування. Це дозволяє вирішувати проблеми систематизування видів мікроорганізмів загальної біології та порівняльної мікробіології.

Навіщо їх фарбувати

Бактерії – це практично прозорі організми, та без застосування фарбування вони погано видно для звичайній мікроскопії. Можна використовувати спеціальні види мікроскопії (фазово-контрастну, в темному полі) для вивчення об'єктів, але найбільш простим способом є фарбування, після якого бактерії стають видні в звичайний світловий мікроскоп.

Підготовка зразка

Незалежно від застосовуваної методики фарбування, існують єдині правила підготовки досліджуваного об'єкта. Обов'язковими є наступні стадії:

Стерильними інструментами робиться мазок на предметне скло.

Зразок підсушується. Це робиться при кімнатній температурі або з використанням сушильних шаф.

Далі слідує стадія фіксації – спеціальними складами мікроорганізми прикріплюються до скла.

Власне фарбування – зразок покривається барвником на фіксований період часу, після чого змивають.

Остаточна сушка – зразок знову висушується.

Найпоширеніші барвники

Найчастіше використовуються барвники на основі аніліну з різними значеннями кислотних показників (рН). Більшість барвників – порошки, які розводять в спирті.


Барвники, в яких фарбувальними агентами є катіони, називаються основними (рН більше 7). З їх допомогою можна забарвити мікроорганізми в червоний (фуксин, сафранін), фіолетовий (метилвиолет, тионин), синій (метиленова синь), зелений (малахітова зелень), коричневий (хризоидин) і чорний (индулин) кольору. Барвники, в яких фарбувальними агентами є аніони, називаються кислотними (рН менше 7). Вони пофарбують зразок у червоний (еозин), жовтий (пикрин) або чорний (нігрозин) кольору. Є група нейтральних барвників (наприклад, родамін В), де фарбувальними агентами виступають і катіони і аніони.

Культура жива чи мертва

Методи фарбування діляться на дві групи згідно з життєвою формою досліджуваного зразка.

Вітальне (прижиттєве) фарбування. Цей метод дослідження властивостей мікроорганізмів використовується при вивченні живих тканин, що дозволяє спостерігати за процесами життєдіяльності мікробів. Для такого фарбування використовуються барвники з низькою токсичністю та високою проникаючою здатністю.

Поствитальное фарбування. Це фарбування мертвих або забитих мікроорганізмів. Завдяки тінкториальними властивостями бактерій, мікробіологи визначають їх структуру. Саме таке забарвлення застосовується найбільш широко.

Грампозитивні та грамнегативні

Саме такі характеристики бактерій можна зустріти в інструкціях до різних медичних препаратів. Цей спосіб вивчення тинкториальных властивостей бактерій заснований на використанні генциантового фіолетового барвника і фіксації йодом. Це методика Ганса Крістіана Грама, данської лікаря, який запропонував її в 1884 році. В результаті такого фарбування бактерії поділяються на дві групи:

Грам (+) – забарвлюються в синій колір (стафілококи і стрептококи).

Грам (-) – забарвлюються в колір від рожевого до червоного (ентеробактерії, сальмонели, кишкові палички).

Різний результат фарбування виходить з-за неоднакових тинкториальных властивостей стінок бактерій. Метод забарвлення Грама і сьогодні є основним при діагностиці деяких інфекційних хвороб.

Інші методики фарбування

Дамо характеристику ще декількома методиками, широко застосовуваним у бактеріології.

Метод Ціля-Нельсона – визначає кислотну стійкість бактерій. По ній виявляють збудників туберкульозу і мікобактеріозу.

Методика Романовського-Гімзе – забарвлює ацидофільні (оцтовокислі та молочнокислі) бактерії в червоний, а базофільні (спірохети і простіші) – в синій колір.

Методика Морозова – забарвлює бактерії в коричневий колір і робить їх видимими джгутики.

Можна побачити спори

Фарбування фукцином Циля дозволяє побачити спори бактерій. Маючи після фарбування рожевий колір, їх добре видно на тлі блакитних бактерій. Цей метод також є інструментом бактеріології та має велике практичне значення.