Термін "мікроскопія" має грецькі корені. У перекладі він означає дослідження об'єктів із застосуванням високоточних приладів. Останнім часом все більш популярними стали люмінесцентна і електронна мікроскопія .

Роздільна здатність

Під нею, як правило, розуміють мінімальну відстань, на якому можуть перебувати чітко помітні об'єкти. Від роздільної здатності устаткування буде залежати ступінь проникнення у мікроскопічний світ, можливість розглянути розмір досліджуваного елемента. При великому збільшенні межі об'єктів можуть зливатися. Відповідно, існують певні межі, далі яких наближення елементів безглуздо.

Метод люмінесцентної мікроскопії: механізм

При перетворенні енергії, яку поглинає речовина, видиме випромінювання відбувається світіння. Його називають люмінесценцією. Це явище пов'язане з тим, що деякі речовини під дією світла починають випускати промені з іншого (як правило, великий) довжиною хвилі. Крім цього, деякі об'єкти, що мають при нормальному освітленні певний колір, під впливом ультрафіолету змінюють своє забарвлення.

Специфіка

Об'єкт, який можна побачити в ультрафіолетовому світлі, може випромінювати яскравий блиск, якщо його обробити спеціальною речовиною. В ньому елементи світяться різними кольорами в темряві. Сила випромінювання різна, але, як правило, вона невелика. У цьому зв'язку люмінесцентна мікроскопія ефективна в затемненому приміщенні. При використанні цього виду дослідження об'єкт проглядається у світі, який він сам і випромінює. Хімічний склад тканин, клітин буде впливати на якість вивчення. Люмінесцентна мікроскопія вважається певною мірою гістохімічним дослідженням.

Класифікація

Люмінесцентна мікроскопія може бути первинною чи вторинною. В останньому випадку об'єкт, що обробляється спеціальними сполуками, що дають світіння. Первинна люмінесцентна мікроскопія ґрунтується на власній здатності досліджуваного елемента випромінювати світло.

Обладнання

Люмінесцентна мікроскопія виконується з застосуванням самих різних пристроїв. В якості основного їх елемента виступає освітлювач. Він оснащується лампою ультрафіолетового випромінювання. Крім цього, у пристрої використовується набір фільтрів. У деяких приладах їх досить багато різної конфігурації. В залежності від того, який колір застосовується для збудження люмінесценції – або ультрафіолетовий синій, між джерелом світла і досліджуваним об'єктом поміщають відповідний фільтр. Оскільки світіння мікроскопічного елемента енергетично слабкіше збуджуючого світла, воно буде вловлювати тільки при одній умові. Надлишок променів, що відходять від джерела, повинна бути ізольоване жовто-зеленим фільтром. Він розміщується на окулярі приладу. Найбільш виражений ефект люмінесценції буде тоді, коли фільтр повністю відсіче промені, що відходять від світлового джерела. З чого складається установка у видимому випромінюванні? У ній присутній яскравий світловий джерело і біологічний мікроскоп. Між дзеркалом приладу і лампою встановлюють синьо-фіолетовий фільтр. Це може бути ФС-1 УФС-3 і так далі. Жовтий фільтр надівається на окуляр мікроскопа. З їх допомогою на об'єкт падає синьо-фіолетове світло. Він і збуджує люмінесценцію. Але цей світ може заважати побачити світіння. Тому на шляху до ока він відсікається жовтим фільтром. Установка освітлення проводиться за методом Келера, з одним винятком. Діафрагму конденсора необхідно повністю відкрити. При дослідженні важливо використовувати нефлуоресцирующее иммерсионное масло. Для зниження власного світіння до нього додають нітробензол (2-10 крапель/1 г).

Люмінесцентна мікроскопія: застосування в мікробіології

Перевагами цього виду дослідження є:

Можливість отримання кольорових зображень.

Високий рівень контрастності самоизлучающих елементів на чорному тлі.

Виявлення і визначення локалізації окремих видів вірусів і мікробів.

Можливість вивчення прозорих і непрозорих живих організмів.

Вивчення життєвих процесів у їх динаміці.

Необхідно також сказати, що люмінесцентна мікроскопія сприяє розвитку найтонших методів, гісто - та цитохімії, експрес-діагностики.