Середовище Плоскирєва (іменована ще бактоагаром Ж) є живильним середовищем для вирощування деяких мікроорганізмів, в основному шигел і сальмонел. Як джерело для неї використовують інфіковані матеріали: сечу, жовч, випорожнення.

Історія

Микола Іванович Плоскирів - радянський мікробіолог і заслужений лікар РРФСР. Він народився в 1869 році і помер в 1948 більшу частину життя пропрацював у рідному місті Томську. В 1888 році він, майбутній вчений, не закінчивши шостий клас школи, поступив на військову службу. Закінчити навчання він зміг тільки 1892 році, після чого здав іспити на вступ в Імператорський Томський університет, навчався на медичному факультеті. У 1898 році отримав звання лікаря.


Плоскирів брав участь у російсько-японській війні, а після неї працював у томському госпіталі. У 1910 році призначено на посаду керівника томської шкірно-венерологической лікарні і протягом тридцяти років був її незмінним головою. Так само учений був одним із засновників шкірно-венерологічного диспансеру в Томську. Микола Іванович Плоскирів написав цілу серію робіт, присвячених боротьбі з венерологическими захворюваннями.

Склад

Середовище Плоскирева - матеріал для культивування кишкових бактерій, а значить, повинна містити кілька видів поживних речовин. Випускається вона у сухому вигляді. Досить велику частку в її загальній масі має панкреатичний гідролізат кільки (104 г/л). Трохи менше припадає на двузамещенний гидроцитрат натрію (85 г/л). Також тут міститься сухий поживний бульйон і молочний цукор (862 і 73 г/л).


Друга назва середовища Плоскирєва - бактоагар Ж У його складі присутній агар в кількості 694 г/л. Вміст безводного сериоватистокислого натрію дорівнює 51 г/л. Є наявність зневодненого динатрію фосфату - 21 г/л, натрієвих солей жовчних кислот близько 346 г/л, а кальцинованої соди - 24 р. Менш грама міститься в ній індикаторів - нейтрального червоного (005) і діамантового зеленого (00002). Вміст йоду - 013.

Застосування

Вивчення біохімічних процесів бактерій грає дуже важливу роль в діагностиці захворювань, які спричиняють анаеробні організми. Видів, що входять у це сімейство, - сотні. Вони практично ідентичні в морфології та культуральних властивостях, і самий надійний спосіб відрізнити їх один від одного - це вивчення біохімії. Дослідження починається з засівання патологічного матеріалу на живильне середовище. Вона диференціально-патологічна для кишкової групи бактерій, і до її складу, крім мясопептонного агару, входять індикатор і лактоза. Здатність переробки лактози - важливий ознака диференціації ентеробактерій. Якщо це виявляється, то pH зміщується в бік кислотності і спрацьовує індикатор, що забарвлює колонію. В інших країнах можуть використовуватися інші поживні середовища, але механізм їх дії відповідає трьом найбільш поширеним в Росії - це середовища Ендо, Левіна і середовище Плоскирева.

Опис методу

За кордоном аналогом середовища Плоскирева є так званий MacConkey Agar. У готовому вигляді розчин прозорий, має легкий рожево-жовтий відтінок. Колонії, здатні переробляти лактозу, в середовищі Плоскирева дають червоний (брусничний) колір. Якщо ж бактерія не може переробляти її, колонія або безбарвна або має слабке забарвлення.
Зважаючи на те, що склад середовища Плоскирева входять речовини-інгібітори (брильянтовий зелений, жовчні солі, йод), вона фактично повністю пригнічує ріст грампозитивної флори, а в першу добу значно затримує ріст эшехирий, а так само інший зазвичай супутньої мікрофлори.

Другий етап

Далі відбувається відбір цікавить колонії, і вона засівають на середовища первинної диференціації і накопичення. Середовища, на яких відбувається засів, повинні містити кілька субстратів. Бактеріальна культура повинна виявити ферментативну активність по відношенню до них, до того ж середовища розташовуються в пробірках так, щоб було дві ділянки:

той, на якому скошений агар;

зі стовпчиком.

Цікавить дослідника колонія заселяється на скошену частину щільним штрихом, а в стовпчик - уколом. На цьому етапі використовуються середовища Рессела, Клиглера або Олькеницкого. Як диференційно-діагностична використовується і середовище Плоскирева.

Мікробіологія і патогенні організми

Агар Плоскирева є важливим фактором у виявленні інфекцій, викликані ентеробактеріями. Так, наприклад, на ній вирощують і диференціюють колонії мікроорганізмів, які є збудниками бактеріальної дизентерії. Це анаеробні організми, що входять в рід Schigella. Подібно всім, хто є частиною сімейства кишкових бактерій, шигели мають вигляд паличок, розміром два мікрометра. Вони не утворюють капсул і спор, не мають джгутиків - це дозволяє відрізняти їх від сальмонел, які, в свою чергу, рухливі. Вони добре ростуть на найбільш простих середовищах при температурі трохи вище кімнатної (35-37°С) і 74 pH. За характером росту, колонії не відрізняються від сальмонел. Як говорилося вище, мікроорганізми можуть практично не мати морфологічних відмінностей, проте істотно розрізнятися в біохімічних процесах життєдіяльності. Так, виключаючи шигели Ньюкестл, при ферментації вуглеводів відбувається утворення кислоти без газу. За винятком шигел Зонне, вони не можуть ферментировать лактозу, але розщеплюють глюкозу. Так само до їх ключових особливостей можна віднеси те, що вони можуть редукувати нирати в нітрити. Їх колонії не розщеплюють сечовину, а так само в живильному середовищі не відбувається розрідження желатину.

Збір і підготовка посівного матеріалу

Щоб виявити збудників дизентерії, необхідні мікробіологічні дослідження заражених середовищ, тобто випорожнень хворого. Після отримання матеріалу, необхідно якомога швидше робити посів. Якщо це неможливо, джерело потрібно помістити в консервуючий речовина - фосфатну буферну суміш або гліцерин. При температурі 4°С вони можуть зберігатися не більше доби. Збирання матеріалу необхідно проводити за допомогою ректальної скляної трубки, що вводиться в пряму кишку. Для дослідження матеріалу вибираються гнійно-слизові шматочки, які повинні бути промиті в двох-трьох пробірках ізотонічного розчину хлориду натрію. Нанесення патогенних бактерій на середовище Плоскирева проводиться скляним шпателем. Необхідно на невеликій ділянці втерти його в агар, потім відірвати шпатель від середовища, а залишковий матеріал втерти в незасіяній поверхню. Якщо посів робиться в кілька чашок, то кожну з них потрібно засівати нову порцію. Якщо слизово-гнійних шматочків немає у взятих на аналіз виділеннях, це ще не означає, що там не присутні патогенні мікроорганізми. В такому випадку необхідно емульгувати фекалії в 10 мл розчину хлориду натрію (концентрація 085%), потім засіяти одну або дві краплі на середовище Плоскирева. Неэмульгированний стілець можна засівати в селенитовий бульйон. Він же використовується, якщо замість фекалій є блювотні маси або промивні води.

Мікробіологічна діагностика

На першому етапі мікробіологічного дослідження проводиться посів патогенних бактерій в дві чашки, щоб потім спостерігати, як ростуть шигели. На середовищі Плоскирева проводиться один посів, другий - на середовищі Левіна або Ендо. Зважаючи на те, що з'явилися штами шигел, стійкі до антибіотиків, до середовищ додається левоміцетин. Потім протягом доби відбувається інкубація в термостаті при температурі 37°С. На другий день потрібно вивчити виросли колонії. Ті, що не на диференційно-діагностичної середовищі виросли безбарвними, необхідно відсіяти на середовище Ресселя або короткий "строкатий ряд". Далі дослідження проводиться за алгоритмом первинних посівів на них. Колонії шигел на середовище Плоскирева ростуть у вигляді прозорих, безбарвних і дрібних колон. Вони бувають двох видів:

приплюснуті з зазубреними краями;

округлі, опуклі, з характерним вологим блиском.

Три-чотири колонії необхідно микроскопировать і досліджувати рухливість. У разі, якщо останній не виявляється, їх переселяють на середу Олькеницкого, щоб виділити чисту культуру. При відсутності характерних колоній шигел або якщо не спостерігається взагалі ніякого зростання, необхідно на агар Ендо або Плоскирева проводити висів з селенитового бульйону. Якщо типові колонії присутні в достатній кількості, ставиться орієнтовна реакція аглютинації. Використовується суміш сироваток Зонне і Флекснера, реакція проходить на склі.

Подальше дослідження

У третій день відзначаються зміни, що відбулися в колоніях на середовище Ресселя. Якщо є культура, яка не розкладає лактозу, а глюкозу сбраживает з утворенням кислоти, її відокремлюють і досліджують, проводять мікроскопію, а також проводять посів на "строкатий ряд", однак на цей раз розгорнутий. Так само ставиться реакція аглютинації з метою серологічної ідентифікації. В останній день можна зробити висновок на підставі змін у строкатому ряді" (відбувається ферментація вуглеводів), а так само підводяться підсумки реакції аглютинації.

Зберігання і приготування

Приготування агару Плоскирева відбувається таким чином:

55 г сухої речовини розмішують у літрі дистильованої води.

Кип'ятять протягом двох-трьох хвилин, до тих пір, поки агар повністю не розплавиться.

Розливають у чашки Петрі (стерильність необов'язкова) шаром в 5-6 мм.

Чашки залишають відкритими на півтори години при кімнатній температура (18-25 градусів). Після закінчення цього часу середовище досить застигне і підсохне.

Середовище Плоскирева світлочутлива та гігроскопічна. Порошок необхідно зберігати в герметичній упаковці, відносна вологість повітря в приміщенні не повинна перевищувати 60%. Оптимальна температура для зберігання від 2°С до 25°С. Необхідно дотримуватися наведені правила зберігання, в іншому випадку можливі неточні результати досліджень.